貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞,因?yàn)槲⑸镂廴疽矔€原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細(xì)胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細(xì)胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細(xì)胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細(xì)胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時間點(diǎn)后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細(xì)胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預(yù)定的時間點(diǎn)檢測其還原度。 |
貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞,因?yàn)槲⑸镂廴疽矔€原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細(xì)胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細(xì)胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細(xì)胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細(xì)胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時間點(diǎn)后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細(xì)胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預(yù)定的時間點(diǎn)檢測其還原度。 |
貼壁細(xì)胞和非貼壁細(xì)胞都適用。所有操作在無菌條件下進(jìn)行。避免污染細(xì)胞,因?yàn)槲⑸镂廴疽矔€原alamarBlueTM,培養(yǎng)基中應(yīng)添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、兩性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化還原指示劑是pH敏感的,推薦使用磷酸緩沖液。10%胎牛血清對比色法檢測無影響,但是會淬滅部分熒光;因此,用熒光法檢測時對照溶液中需添加10%BSA。酚紅對檢測也有一定影響,結(jié)果會上調(diào)0.03%。一般來說,應(yīng)使用非還原性的培養(yǎng)基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系統(tǒng)中使用時,細(xì)胞密度、孵育時間、培養(yǎng)基成分及使用濃度等條件需要先優(yōu)化。 收集需檢測的細(xì)胞,以優(yōu)化的密度鋪于加入10%(v/v)alamarBlueTM的新鮮培養(yǎng)基上, 1、 細(xì)胞培養(yǎng):RPMI培養(yǎng)基,添加HEPES、10%胎牛血清、1%谷氨酸鹽、適當(dāng)?shù)目股兀?/div> 2、 細(xì)胞覆蓋率達(dá)80%時,用胰酶消化鋪于微孔板中,密度在每孔825~80000個細(xì)胞。 3、 1個小時后,加入alamarBlueTM,37℃ 5%CO2培養(yǎng) 4、 到預(yù)定的時間點(diǎn)后檢測alamarBlueTM的還原情況 注意:若檢測的還原度不夠,可選擇繼續(xù)培養(yǎng)再檢測,這是該方法的一大*之處 研究特殊藥物對細(xì)胞周期的影響(如roscovitine,一種抗癌藥、周期蛋白激酶抑制劑),胰酶消化細(xì)胞、收集并鋪于含藥物的培養(yǎng)基上,37℃ 5%CO2培養(yǎng)2天;除去之前的培養(yǎng)基換上含10%(v/v)alamarBlueTM的新培養(yǎng)基,在預(yù)定的時間點(diǎn)檢測其還原度。 |